Ang pangunahing prinsipyo ng synthesis ng DNA

Ang kemikal na synthesis ng DNA ay batay sa solid-phase synthesis na diskarte at phosphoramidite chemistry.Iba sa biological DNA synthesis, ang materyal sa kemikal na DNA synthesis ay DMT (4, 4-dimethoxytrityl) at phosphoramidite modified deoxyriboxyside, tulad ng ipinapakita sa Figure 1. Ang DNA synthesis ay isinasagawa sa solidong suporta (maaari kaming mag-alok ng iba't ibangOligo Synthesis Column), ie CPG (controlled pore glass) at PS (polystyrene), at ang buong synthesis ay ginagawa sa isangDNA/RNA synthesizer, na aming pangunahing kagamitan, ay may iba't ibang modelo tulad ng: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 at iba pa, ang direksyon ng synthesis ay mula 3' hanggang 5', at ang isang nucleotide ay ipinakilala sa solidong suporta sa pamamagitan ng isa cycle ng synthesis.Ang karaniwang synthesis cycle ay naglalaman ng apat na hakbang, Deprotection, Coupling, Capping at Oxidation (Figure 2).Ang Deprotection ay nakatakdang alisin ang DMT group sa solid support o ang 5' hydroxyl group sa nakaraang nucleoside, ang 3% trichloroacetic acid sa dichloromethane ay ginagamit bilang deprotection reagent.Pagkatapos ay pinahintulutan ang phosphoramidite modified deoxyriboxyside sa pagkakalantad ng hydroxyl group sa tulong ng activator, ie 5-ethylthiotetrazole o 4, 5-dicyanoimidazole, na bumubuo ng phosphitetriester (III), at natanto ang hakbang ng Coupling.Isinasagawa ang Capping step upang harangan ang hindi na-react na hydroxyl group sa panahon ng coupling step, upang mabawasan ang pagbuo ng mga hindi gustong pagkakasunod-sunod ng depekto.Sa wakas, ang hindi matatag na phosphitetriester (III) ay na-oxidized sa chemical stable na phosphotriester (V) na may iodine bilang oxidant sa kasalukuyan ng pyridine.

Ang synthesized DNA ay maaaring cleavage mula sa solidong suporta sa pamamagitan ng aminolysis, ang 2-cyanoethyl protected group sa phosphotriester at ang amide sa nucleobase ay sabay na na-cleavage, ang Synthesis Plates at Synthesis Columns sa mga rack ay direktang inilalagay sa reaction chamber ngKagamitang Pang-deproteksiyon.Ang krudo na DNA ay maaaring ihanda ng HPLC, electrophoresis at OPC kapag hinihiling, maaari rin naming ibigay sa iyo angKagamitan sa Paglilinispara sa Post-processing.